胰岛-脑1基因真核表达质粒的构建及鉴定

• 作者: 向若兰 孙琦 李玉秀 王姮
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: 胰岛-脑1基因 真核表达载体 转染
• 年，卷（期）: 2007,（7）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 806-810
• 页数: 5页
• 分类号: R34-33|R587
• 字数: 3126字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6325.2007.07.018

摘要

目的 构建并鉴定表达胰岛-脑1(Islet-Brain 1,IB1)基因的真核细胞表达质粒.方法 从人胰岛细胞瘤提取总RNA,根据IB1 cDNA文库的序列利用RT-PCR扩增IB1基因.将此基因插人带有绿荧光的真核表达载体pEGFP-N1的EcoR1/KpnI酶切位点区域,携带IB1基因的真核表达质粒转染到胰岛细胞系(RINm5F),最后通过G418筛选获得稳定的携带IB1基因的胰岛细胞系.利用倒置相差荧光显微镜、流式细胞仪、Western blot鉴定的质粒及转染的细胞系.结果 RT-PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分析为840 bp的分子(IB1 AA1-280),测序分析证明与Genbank IB1 cDNA具有相同的序列.用EcoR I和Kpn I消化可见两条条带,Western blot分析证明IB1基因在RINm5F细胞表达.结论 成功构建了pEGFP-N1-IB1真核表达载体,转染到胰岛细胞系并稳定表达.