尿激酶受体反义RNA真核表达质粒的构建

• 作者: 王维山 管兴发 董金波
• 来源期刊: 中国现代医药杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 反义 质粒 尿激酶受体
• 年，卷（期）: 2007,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 4-8
• 页数: 5页
• 分类号: R4
• 字数: 3240字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-9463.2007.09.002

摘要

目的 构建尿激酶受体(UPAR)基因pcDNA3.1(-)真核表达质粒,为进一步研究通过UPAR干预类风湿关节炎的发生发展提供实验基础.方法 取冰冻保存的小鼠肝癌组织,应用TRIzol法提取总RNA,琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性,并用紫外分光核酸蛋白分析仪测定RNA浓度和纯度.使用一步法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒获得目的 基因(UPAR)cDNA片段.用CaCl2法诱导感受态细胞.将真核载体pcDNA3.1(-)在多克隆位点处用HindⅢ、BamH Ⅰ双酶切线性化,切胶纯化回收;将纯化回收的pcDNA3.1(-)线性化载体和UPAR基因片段定向及反向连接,构建以pcDNA3.1(-)为载体的反义UPAR基因表达质粒;转化JM109大肠杆菌;酶切证实的阳性克隆行测序分析.结果 琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性,见28S,18S条带完整,而且28S条带亮度为18S的1倍左右,认为RNA完整性良好,并用紫外分光核酸蛋白分析仪测定RNA纯度A260/A280=1.9051,认为RNA纯度良好;RNA浓度为450mg/L;阳性克隆经双酶切后行10g/L琼脂糖电泳,在DNA Marker 500bp和5.3bp附近可见两条明显条带,与所需目的片段大小相符,证实为阳性克隆,重组质粒构建成功;DNA测序结果与预期目的 片段序列一致.结论 反义UPAR真核表达重组质粒构建成功.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	董金波	新疆石河子大学医学院第一附属医院骨一科	35	288	10.0	15.0
2	王维山	新疆石河子大学医学院第一附属医院骨一科	21	196	8.0	13.0
3	管兴发	新疆石河子大学医学院第一附属医院骨一科	2	52	2.0	2.0