携EGFP的人低氧诱导因子-1α腺病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 吴平生 王月刚 童锴 谢宜军 郭寿贵
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 低氧诱导因子-1α 绿色荧光蛋白 基因治疗
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 117-120
• 页数: 4页
• 分类号: Q503|Q513.1|Q782
• 字数: 3195字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2007.02.008

摘要

目的 构建携EGFP的人低氧诱导因子(hypoxia-induciblefactor 1 alpha,HIF-1α)腺病毒表达载体,为研究人HIF-1α基因对冠心病的血管新生作用奠定基础.方法 采用分子克隆技术,以Kpn Ⅰ、Apa Ⅰ双酶切pcDNA3.1(+)-HIF1α质粒获得HIF-1α cDNA,克隆到质粒pEGFP-C1,以Nhe Ⅰ、Apa Ⅰ双酶切得到EGFP-HIF-1α cDNA,重组到穿梭质粒pShuttle2,再以PI-Sce Ⅰ和I-Ceu Ⅰ双酶切重组穿梭质粒,获得含有EGFP-HIF-1α cDNA的表达盒,与线性化的腺病毒骨架质粒Adeno-X Viral DNA连接,重组成pAdeno-EGFP-HIF-1α腺病毒质粒,脂质体法转染HEK293细胞,荧光显微镜下观察结果,在HEK293细胞中包装成为重组Adeno-EGFP-HIF-1α腺病毒,并进行PCR鉴定及滴度测定.结果 经酶切鉴定及PCR证实重组腺病毒质粒构建成功,包装后冻融细胞的上清PCR检测重组腺病毒包装成功,病毒滴度为2×109nfu/ml.结论 成功构建重组腺病毒Adeno-EGFP-HIF-1α,为冠心病的HIF-1α基因治疗研究奠定更直观的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴平生	南方医科大学南方医院心内科	131	614	13.0	18.0
2	郭寿贵	南方医科大学南方医院心内科	7	23	3.0	4.0
3	王月刚	南方医科大学南方医院心内科	48	237	8.0	12.0
4	谢宜军	南方医科大学南方医院心内科	9	33	3.0	5.0
5	童锴	南方医科大学南方医院心内科	7	22	3.0	4.0