小牛凝乳酶原基因在乳酸克鲁维酵母中的表达及遗传稳定性研究

• 作者: 冯镇 张兰威
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 工学
• 关键词: 乳酸克鲁维酵母 凝乳酶 分泌表达
• 年，卷（期）: 2008,（7）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 297-302
• 页数: 6页
• 分类号: TS201
• 字数: 5253字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1002-6630.2008.07.063

摘要

目的:构建小牛凝乳酶原乳酸克鲁维酵母分泌型表达载体,表达重组凝乳酶原.方法:通过PCR获得小牛凝乳酶原cDNA片段,将目的基因插入酵母表达载体pKLAC1 α结合因子分泌信号下游,得到重组载体pKLAC1-prochymosin.SacII线性化后氯化锂转化乳酸克鲁维酵母GG799,用含5mmol/L乙酰胺的YCB固体培养基筛选转化酵母菌,PCR鉴定目的基因,利用特异性引物筛选多拷贝转化子.阳性转化子经摇瓶表达,取上清TCA沉淀后做Tricine SDS-PAGE分析并检测凝乳酶的活力,通过检测阳性转化子产凝乳酶的活力考察其遗传稳定性.结果:经测序及PCR证实,凝乳酶原cDNA准确插入酵母表达载体pKLAC1中,转化后重组载体通过同源重组整合进入酵母基因组中.Tricine SDS-PAGE分析证明凝乳酶的分子量约为36kD,酸处理后测得培养基中凝乳酶的酶活为83SU/ml,阳性转化子遗传稳定性好.结论:成功构建出酵母表达载体pKLAC1-prochymosin,在培养基中获得分泌的重组凝乳酶原,经过酸处理后凝乳酶原转化为有活性的凝乳酶.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张兰威	哈尔滨工业大学食品科学与工程学院	196	1765	22.0	28.0
2	冯镇	东北农业大学食品学院	26	156	7.0	11.0