shRNA干扰肝癌细胞Kir6.2基因表达载体的构建及鉴定

• 作者: 丁生才 李靖 杨彤翰 梁平 苏晓通
• 来源期刊: 西南国防医药
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 肝细胞癌 RT-PCR Western Blotting
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 340-343
• 页数: 4页
• 分类号: R735.8
• 字数: 3514字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-0188.2008.03.010

摘要

目的:构建shRNA体内表达载体pGenesil-3-siRNA,筛选出抑制Kir6.2基因表达的有效靶序列.方法:以Kir6.2基因为目的基因,以产生shRNA质粒载体pGenesil-3为表达模板,细胞内转录合成2条siRNA,脂质体转染法将shRNA质粒载体pGenesil-3共转染SK-Hep1细胞,将细胞分为SK组(未转染)、HK组(转染阴性对照质粒)、K1组(转染重组质粒K1)和K2(转染重组质粒K2)组.经G418筛选出单克隆进行培养,用RT-PCR和Western Blotting分别检测Kir6.2 mRNA和蛋白的表达,筛选出抑制Kir6.2表达的有效siRNA靶序列.结果:SK、HK、K1和K2组Kir6.2 mRNA表达的相对量分别为0.936±0.042、0.848±0.058、0.225±0.0360、0.171±0.029,K1、K2组Kir6.2 mRNA的表达与HK、SK组比较均明显降低(P＜0.05).SK、HK、K1和K2组的Kir6.2蛋白表达的量分别为0.925±0.045、0.901±0.067、0.269±0.024、0.318±0.031,K1、K2组Kir6.2蛋白的量与HK、SK组比较均明显降低(P＜0.05).结论:shRNA抑制了肝癌细胞Kir6.2基因的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁平	第三军医大学新桥医院肝胆外科	126	612	12.0	16.0
2	杨彤翰	第三军医大学新桥医院肝胆外科	46	262	9.0	14.0
3	李靖	第三军医大学新桥医院肝胆外科	83	480	12.0	17.0
4	苏晓通	第三军医大学新桥医院肝胆外科	3	2	1.0	1.0
5	丁生才	第三军医大学新桥医院肝胆外科	13	69	5.0	8.0