大鼠IP-10-PE38KDEL重组免疫毒素原核表达载体的构建及表达

• 作者: 孙岚 张林 李明远 李虹 林媛 祁志荣 蒋忠华
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: IP-10 绿脓杆菌外毒素 重组免疫毒素 原核表达
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 5-8
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3104字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-8861.2008.01.002

摘要

目的 构建大鼠γ干扰素诱导蛋白10(IP-10)基因和绿脓杆菌外毒素衍生物PE38KDEL基因的原核融合表达载体,并对其表达进行鉴定.方法 通过PCR获得本实验所需要的IP-10基因片段,通过酶切含有PE38KDEL的质粒PRKL459K获得绿脓杆菌外毒素衍生物PE38KDEL基因 ,再通过适当的酶切及连接反应,构建IP-10与PE38KDEL融合基因的原核表达载体pET-32a (+)-IP-10-PE38KDEL,重组质粒经限制性内切酶、PCR及DNA序列测定证实构建成功后, 转化感受态大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE及Western-blotting分析证实其相对分子质量和特异性.结果 酶切分析、PCR及DNA序列测定证实,IP-10-PE38KDEL融合基因被成功克隆入原核表达载体pET-32a(+),并在大肠杆菌中稳定表达,表达产物的相对分子质量与预期值相符,且所表达蛋白可被抗PE的特异性抗体识别.结论 成功构建了原核表达载体pET-32a(+)-IP-10-PE38KDEL,其融合基因在大肠杆菌中高效表达,为进一步研究其功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李明远	四川大学基础医学与法医学院微生物学教研室	80	362	11.0	14.0
2	张林	四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室	237	1697	19.0	30.0
3	林媛	四川大学基础医学与法医学院微生物学教研室	4	6	2.0	2.0
4	蒋忠华	四川大学基础医学与法医学院微生物学教研室	18	52	4.0	6.0
5	祁志荣	四川大学基础医学与法医学院微生物学教研室	5	17	2.0	4.0
6	孙岚	四川大学基础医学与法医学院微生物学教研室	4	9	2.0	3.0