GST-G3BP Domain 1～5原核表达质粒的构建及其表达

• 作者: 东莉洁 何津岩 方建飞 李晓东 杨洁 葛林 邵洁
• 来源期刊: 天津医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: G3BP 质粒构建 GST-pull down 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-4,21
• 页数: 5页
• 分类号: Q7
• 字数: 3540字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-8147.2008.01.001

摘要

目的:构建GST-G3BP Domain 1～5的融合表达质粒,并在大肠杆菌中稳定表达.方法:PCR扩增G3BP Domain 1～5片段,利用限制性内切酶geaR I和Not I将其连接至载体pGEX-4T-1,将连接产物转化大肠杆菌,挑取单菌落,提取质粒,经PCR和双酶切鉴定后测序.将转化正确的大肠杆菌过夜培养,IPTG诱导融合蛋白表达,immobilized Glu-tathione beads钓取目的蛋白.结果:G3BP Domain 1～5片段均成功连接至载体pGEX-4T-1,在大肠杆菌BL21中可得到稳定表达的融合蛋白.结论:GST-G3BP Domain 1～5的融合表达质粒构建成功.