重组结核分枝杆菌CFP10蛋白的表达、纯化和复性及其免疫特性的研究

• 作者: 万康林 刘志广 吕冰 樊学军 田绿波 罗垲炜 陈肖潇
• 来源期刊: 中国预防医学杂志
• 关键词: 结核分枝杆菌 CFP10蛋白 克隆 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 249-252
• 页数: 4页
• 语种: 中文

摘要

目的 建立重组结核分枝杆菌CFP10蛋白的基因克隆表达、纯化和复性技术,研究其免疫学特性,并评价该重组蛋白在结核病血清学诊断方面的价值.方法 用PCR法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出1hp基因片段,连接到表达载体PET30a上,在大肠杆菌中表达;组氨酸标签(His-Tag)镍柱层析纯化重组蛋白;用ELISA方法进行抗原性初步评价.结果 构建了含CFP10重组质粒的大肠杆菌工程菌,发现目的蛋白主要以可溶形式存在;经镍柱层析获得了纯的重组蛋白,纯度达90%以上;用纯化的CFP10蛋白做抗原,ELISA方法检测105份临床诊断结核病人血清,阳性率达42%.结论 目的基因克隆入宿主菌中并表达成功,具有天然结构和高纯度的重组融合蛋白有可能成为结核病血清学诊断的组合抗原之一.