串联亲和纯化标记的HMGB1细胞因子诱导片段1融合表达载体构建和蛋白纯化及其功能初步探讨

• 作者: 刘芸 刘铮 吴向玲 姜勇 徐佳 邓鹏
• 来源期刊: 感染、炎症、修复
• 学科: 医学
• 关键词: 高迁移率族蛋白B1 细胞因子诱导片段1 链霉亲和素结合肽 钙调蛋白结合肽 质粒构建 肿瘤坏死因子-α
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 6-10
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 3802字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-8521.2009.01.002

摘要

目的:构建高迁移率族蛋白B1(HMGB1)中细胞因子诱导片段1(CIF1)与串联亲和纯化(TAP)系统中纯化标签链霉亲和素结合肽(SBP)和钙调蛋白结合肽(CBP)序列相融合的原核表达载体,观察重组蛋白对小鼠单核/巨噬细胞白血病细胞释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,为HMGB1参与炎症反应作用机制的研究以及CIF1结构域细胞膜表面受体蛋白的获得和鉴定奠定基础.方法:采用PCR方法分别扩增出CBP-SBP和CIF1的编码序列,构建表达质粒pET-14b/CBP-SBP-CIF.利用Ni-NTA亲和树脂纯化融合蛋白,纯度达85%以上.采用纯化后的蛋白诱导小鼠单核/巨噬细胞白血病细胞RAW 264.7,利用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测RAW264.7细胞释放TNF-α的水平变化.结果:表达载体构建正确,CIF1重组蛋白表达量高,纯度好.当蛋白浓度大于0.5 ng/μl时,CIF1重组蛋白诱导细胞TNF-α的分泌量与对照组相比差异具有显著性(P<0.05),并且在CIF1蛋白浓度0～2.5 ng/μl范围内,TNF-α的分泌量与CIF1重组蛋白的浓度呈显著的剂量依赖关系.结论:原核表达纯化了His-CBP-SBP-CIF1融合蛋白,该融合蛋白可以有效地作用于巨噬样细胞内的信号转导过程,介导了炎症因子TNF-α的分泌表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姜勇		72	377	8.0	17.0