人NANOGP8蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

• 作者: 张经余 戴建武 李美香 王爱娥
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: NANOGP8 Nanog 表达 多克隆抗体 效价鉴定
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 30-35
• 页数: 6页
• 分类号: Q789
• 语种: 中文

摘要

为获得抗人NANOGP8基因的多克隆抗体,采用PCR法扩增了NANOGP8基因,经序列测定正确后,连接到pET-28a质粒上,将获得的重组质粒pET-28a-NANOGP8转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在16℃和37℃下分别进行诱导表达,经SDS-PAGE检测发现融合蛋白以包涵体形式存在于37℃诱导表达的沉淀中,大小约为45kDa.对包涵体进行洗涤、溶解处理,经Chelating Sepharose Fast Flow亲和层析柱进行纯化.对纯化得到的蛋白进行SDS-PAGE及Western blot免疫印记杂交检测,得到了单一条带.用获得的高纯度融合蛋白免疫新西兰兔,得到兔来源的抗人NANOGP8血清.对抗血清进行蛋白免疫印记杂交反应和酶联免疫吸附反应检测,结果显示成功制备了高滴度和特异性的兔抗人NANOGP8多克隆抗体,与市售抗人Nanog多克隆抗体相比,杂交更迅速,效果更明显.为进一步研究NANOGP8基因在肿瘤发生、发展中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张经余	北京大学临床肿瘤学院北京市肿瘤防治研究所	2	16	2.0	2.0
2	王爱娥	中国人民解放军第二炮兵总医院呼吸科	2	7	1.0	2.0
3	李美香	中国科学院遗传与发育生物学研究所	2	9	2.0	2.0
4	戴建武	中国科学院遗传与发育生物学研究所	20	83	6.0	8.0