新基因BC047440原核表达载体构建及其重组蛋白的表达纯化

• 作者: 刘世呈 左国华 李靖 梁平 郑璐 黄小兵
• 来源期刊: 中华肝胆外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 癌 肝细胞 BC047440 基因克隆
• 年，卷（期）: 2009,（12）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 934-937
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3799字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1007-8118.2009.12.019

摘要

目的 构建肝癌相关新基因BC047440原核表达载体,表达并纯化出其重组蛋白.方法 从HepG2细胞中提取总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增BC047440cDNA,克隆进质粒pMD19-T,转化E.coliDH5α,测序正确后,酶切目的基因片段,插入质粒pET-28a(+),转化E.coliBL21,IPTG诱导蛋白表达,Ni-NTA柱亲和层析纯化重组蛋白.结果 电泳证实RT-PCR扩增产物与预期目的基因BC047440长度一致.RT-PCR纯化产物与载体pMD19-T连接后,经蓝白斑筛选,挑出5个白色菌落做酶切鉴定,其中2个菌落被证实为阳性克隆.测定其基因序列,结果显示与Genbank公布的BC047440基因序列完全一致.将BC047440cDNA插入质粒pET-28a(+),转化E.coliBL21,培养过夜后,挑选7个白色菌落做酶切鉴定,证实均为阳性克隆.IPTG诱导其中一个克隆表达蛋白,SDS-PAGE电泳分析表明,在相对分子质量23000左右出现新的蛋白表达条带,诱导4h后表达蛋白量最多,占菌体总蛋白的22.3%.将诱导3h的菌体超声破碎后,Ni柱亲和层析,50和125mmol/L咪唑洗脱液SDS-PAGE电泳显示出清晰的单一条带.结论 成功构建BC047440基因原核表达载体,表达并纯化出重组蛋白,为深入研究其临床应用打下基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁平	第三军医大学新桥医院肝胆外科	126	612	12.0	16.0
2	李靖	第三军医大学新桥医院肝胆外科	83	480	12.0	17.0
3	黄小兵	第三军医大学新桥医院肝胆外科	57	283	10.0	13.0
4	郑璐	第三军医大学新桥医院肝胆外科	43	235	8.0	12.0
5	左国华	第三军医大学新桥医院肝胆外科	28	118	7.0	9.0
6	刘世呈	第三军医大学新桥医院肝胆外科	8	40	5.0	6.0