肿瘤特异的sea基因真核表达质粒的构建及在肺癌细胞中的功能研究

• 作者: 朱大冕 朱道银 李奕璇 陈全
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 医学
• 关键词: 葡萄球菌肠毒素A 肺癌 基因治疗
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 109-112,121
• 页数: 5页
• 分类号: R73
• 字数: 4134字
• 语种: 中文

摘要

构建Survivin启动子调控的葡萄球菌肠毒素A(SEA)的真核表达质粒,检测其在人肺腺癌A549细胞中的特异性表达以及表达产物的超抗原活性.以PCR法扩增sea基因,以含有Survivin启动子为调控序列的pGL-S-RED质粒为基础,构建pGL-S-SEA真核表达质粒.用脂质体转染A549细胞,以RT-PCR法检测sea基因表达水平.制备健康献血者PBMC,用pGL-S-SEA质粒转染A549细胞的上清液和细胞裂解液进行PBMC刺激试验,以MTT法检测其促细胞增殖效应.结果显示,成功构建Survivin启动子调控的真核表达质粒pGL-S-SEA.重组质粒在A549细胞中启动了sea基因的表达,其转录强度为内参(GADPH基因)的65.96%,在对照MRC-5细胞中无明显表达.该质粒转化A549细胞的裂解液具有促进人PBMC增殖活性、上清液无明显促PBMC增殖作用,裂解液组、上清液组和PHA阳性对照组的刺激指数分别为1.29、0.95和1.58.结论成功构建pGL-S-SEA质粒,其在A549细胞的表达产物具有诱导人PBMC增殖的超抗原活性,为下一步将其作为基因疫苗治疗肺癌奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱道银	重庆医科大学基础医学院免疫学教研室	113	510	10.0	15.0
2	陈全	重庆医科大学基础医学院免疫学教研室	58	230	9.0	11.0
3	朱大冕	重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心	6	17	2.0	4.0
4	李奕璇	重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心	5	14	2.0	3.0