小鼠XBP1基因RNA干扰慢病毒载体的构建及筛选

• 作者: 严军 刘庆 张冲 杨策 王海燕 蒋建新 钟河江 黄苏娜
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: RNA干扰 XBP1 慢病毒
• 年，卷（期）: 2009,（8）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1401-1404
• 页数: 4页
• 分类号: Q95-3|Q75|Q78
• 语种: 中文

摘要

目的:构建小鼠XBP1基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体,筛选具有较好干扰效率的小鼠XBP1 siRNA靶序列.方法:针对小鼠XBP1基因特异性序列,设计4个RNAi靶序列及1个阴性对照序列,合成含有正义和反义Oligo DNA的互补DNA序列,退火形成双链DNA,并克隆到经Age Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切后的pGCL-GFP载体连接产生短发卡RNA(shRNA)慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,DNA测序鉴定.由病毒包装系统进行包装,经滴度测定后感染NIH3T3细胞,应用Real-time PCR鉴定干扰效率.结果:PCR鉴定与DNA测序证实合成的寡核苷酸链插入正确,293T细胞测定病毒滴度为1×108TU/ml.Real-timePCR证实XBP1-siRNA-3靶点的干扰效率最高,其干扰效率达到95%以上.结论:成功构建并筛选了小鼠XBP1基因RNAi慢病毒载体,为研究XBP1在巨噬细胞免疫功能调控中的作用奠定了基础.