强力霉素调控的真核表达体系ALC-pTet-on Advanced成釉细胞株的建立

• 作者: 何永云 刘晓影 孙岩 张娟娟 李东亮 李武修 梁广智 高玉光
• 来源期刊: 牙体牙髓牙周病学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 转染 诱导表达 tet-on Advanced系统 成釉细胞系
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: R780.1
• 语种: 中文

摘要

目的:建立可受强力霉素调控的高表达外源基因的真核表达体系ALC-pTet-on Advanced细胞株,用于基因功能的研究.方法:将质粒pTet-on Advanced转染至成釉细胞系(ALC),用1 000μg/mL的G418筛选抗性克隆.用RT-PCR进行DNA的整合鉴定,并瞬时转染荧光素报告基因(pTRE-Tight-Luc)对pTet-on Advanced阳性克隆株的功能进行鉴定.结果:G418压力筛选后,获得了13个细胞克隆株,RT-PCR检测均表达反义四环素转录激活子(rtTA Advanced),PCR产物测序结果与pTet-on Advanced基因序列一致,表明pTet-on Advanced基因片段已整合进小鼠成釉细胞基因组DNA,荧光素报告基因功能鉴定获得1株诱导表达倍率为22.1的克隆株,且pTet-on Advanced基因阳性的成釉细胞株的形态和生长度与正常成釉细胞没有明显差异.结论:通过脂质体转染的方法成功地获得1株诱导表达倍率为22.1的高表达成釉细胞株,为进一步研究EMPs在成釉细胞中功能打下了基础.