人细胞核诱导凋亡因子1在大肠杆菌中的表达、纯化及多克隆抗体制备

• 作者: 时岚 罗清 赵玫 钟佳玲 马怡茗 黄常志
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: NAIF1 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 抗体工程
• 页码范围: 56-58
• 分类号: R3921.11
• 语种: 中文

摘要

目的:构建人核凋亡诱导因子1(NAIF1)原核表达质粒,在大肠杆菌中表达及纯化NAIF1融合蛋白,制备兔抗NAIF1多克隆抗体,并对其特性进行初步鉴定.方法:PCR法获得人NAIF1序列并将其克隆到原核表达载体pET-32a中,重组表达质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达蛋白,经变性、Ni~+柱亲和纯化、复性后得到纯化的重组人NAIF1蛋白,免疫大耳白兔,制备兔抗人NAIF1多抗血清,以ELISA和Western blot方法检测其效价和特异性.结果:成功获得了高纯度的人NAIF1重组蛋白和高效价的兔抗人NAIF1多抗血清,ELISA检测多抗效价达到1:500 000,Western blot检测证明多抗特异性良好.结论:获得了高纯度的人NAIF1重组蛋白和兔抗人NAIF1多抗血清,为后续针对NAIF1基因功能的研究提供了重要实验材料.