阿维链霉菌Streptomyces avermitilis碱性脂肪酶LpsA2的表达和酶学性质分析

• 作者: 朱国萍 汪劼 王宝娟 苏蕊蕊
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 脂肪酶 阿维链霉菌 LpsA2 表达 进化树
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 酶和蛋白质
• 页码范围: 236-243
• 页数: 8页
• 分类号: Q936
• 语种: 中文

摘要

[目的]本研究将推测的阿维链霉菌(Streptomyces avermitilis)脂肪酶基因lpsA2在大肠杆菌(Escherichia coli)中进行异源表达及系统的酶学性质分析.[方法]提取阿维链霉菌基因组,设计特异性引物,PCR扩增脂肪酶基因lpsA2,使其在大肠杆菌中异源表达,利用6个组氨酸标签纯化脂肪酶LpsA2,并进行酶学性质分析;对LpsA2进行序列比对和进化分析.[结果]氨基酸序列比对显示LpsA2具有脂肪酶典型的由Ser、His和Asp构成的活性部位,即Ser~(130)-Asp~(221)-His~(25),其中Ser位于保守的五肽结构(Gly~(128)-His~(129)-Ser~(130)-Gln~(131)-Gly~(132))中;分子系统学分析显示,LpsA2是脂肪酶第一家族亚家族成员(Subfamily I.7);实验测得纯化的重组脂肪酶LpsA2的最适反应pH为8.0,最适反应温度为50℃;最适底物为对硝基苯酚豆蔻酸酯;在10℃-50℃范围内该酶的激活自由能为6.3 kcal/mol;1 mmol/L Co~(2+)、Hg~(2+)、Zn~(2+)可使酶活性提高至250%以上;15%的二甲基甲酰胺和二甲基亚砜使酶活分别提高至110.7%和138%;0.1%和1%的Span-20可使酶活性分别提高至352.7%和189.7%.[结论]本研究对推测的来源于S.avermitilis的脂肪酶基因lpsA2进行了异源表达和酶学功能鉴定,不仅为脂肪酶的研究积累了更多数据,也为具有优良性能的脂肪酶生物工程菌的筛选奠定了基础,更为其在食品加工、药物合成等工业生产中的应用提供了依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王宝娟	安徽师范大学生命科学学院重要生物资源保护与利用安徽省重点实验室	11	94	4.0	9.0
2	朱国萍	安徽师范大学生命科学学院重要生物资源保护与利用安徽省重点实验室	38	407	11.0	19.0
3	汪劼	安徽师范大学生命科学学院重要生物资源保护与利用安徽省重点实验室	2	28	2.0	2.0
4	苏蕊蕊	安徽师范大学生命科学学院重要生物资源保护与利用安徽省重点实验室	2	8	2.0	2.0