髓系细胞触发受体-1真核表达质粒的构建及鉴定

• 作者: 姚航平 胡艳 舒力琪 陈齐兴
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 受体,免疫/生物合成 膜糖蛋白类/遗传学 重组,遗传 真核表达 髓系细胞触发受体-1
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 477-482
• 分类号: Q78
• 字数: 3736字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2010.05.006

摘要

目的:构建髓系细胞触发受体-1(TREM-1)的真核表达质粒.方法:利用RT-PCR从人外周血总RNA中扩增TREM-1 基因的全长cDNA,插入克隆载体pUCm-T,BamH I和Pst I,酶切后将目的片段插入真核表达载体pEGFP-C3,构建含有TREM-1的重组质粒pEGFP-TREM-1,转染293细胞,用荧光显微镜观察、Western-blot鉴定蛋白表达.将pEGFP-TREM-1重组质粒转染THP-1细胞,100 ng/ml LPS刺激24 h后,半定量RT-PCR检测TNF-α和IL-1β基因的 mRNA水平.结果:经酶切和基因测序证实,克隆的基因片段为TREM-1基因;经转染的293细胞在荧光显微镜下可见荧光,并能表达TREM-1蛋白;重组TREM-1蛋白具有生物学活性,能增强TNF-α和IL-1β基因的mRNA水平.结论:成功构建了能够表达TREM-1的真核表达质粒pEGFP-C3-TREM-1,为进一步研究该基因的功能奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姚航平	浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所传染病诊治国家重点实验室	94	547	12.0	17.0
2	胡艳	浙江大学医学院附属第一医院麻醉科	10	10	2.0	3.0
3	舒力琪		1	2	1.0	1.0
4	陈齐兴	浙江大学医学院附属第一医院麻醉科	10	36	2.0	5.0