凋亡相关斑点样蛋白ASC真核表达质粒的构建及表达

• 作者: 宋婷 袁媛 钟辉 黄蓓
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: 凋亡调节蛋白质类 真核细胞 白细胞介素1β 质粒
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 328-330,369
• 分类号: Q753
• 字数: 2694字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2010.04.008

摘要

目的 构建凋亡相关的斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)真核表达质粒.方法 从人胚肾细胞系HEK293T细胞的总RNA中经过逆转录和PCR获得ASC的全长cDNA双链片段,经过酶切后连接到真核表达载体pcDNA3/flag中,挑选出转化生成的阳性克隆测序,将序列正确的重组质粒命名为pcDNA3/flag-ASC.脂质体转染pcDNA3/flag-ASC质粒到HEK293T细胞中,用Western印迹检测目的蛋白的表达.同时用免疫沉淀和免疫印迹方法检测ASC蛋白与前半胱天冬酶(pro-caspase)-1的相互作用,并用ELISA方法检测ASC蛋白对IL-1β分泌的影响.结果 Western印迹实验证明pcDNA3/flag-ASC可以在HEK293T细胞中表达ASC,并且可以与pro-caspase-1结合,使IL-1β分泌明显降低.结论 构建了重组质粒pcDNA3/flag-ASC,在细胞中表达ASC后具有与pro-caspase-1结合的能力,并具有降低IL-1β分泌的生物活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钟辉	军事医学科学院生物工程研究所	47	246	8.0	14.0
2	黄蓓	安徽大学生命科学学院	33	150	7.0	11.0
3	宋婷	军事医学科学院生物工程研究所	4	11	2.0	3.0
4	袁媛	安徽大学生命科学学院	4	22	2.0	4.0