幽门螺杆菌Cag致病岛hp0540基因的克隆表达及其多克隆抗体的制备

• 作者: 田树伟 谢立苹 邵世和 韩军 黄世腾 黄河
• 来源期刊: 江苏大学学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 幽门螺杆菌 Cag致病岛 CagI 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 282-285,291
• 分类号: R378.99
• 字数: 3419字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7783.2010.04.002

摘要

目的: 构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)Cag致病岛(Cag-pathogenicity island,Cag-PAI)编码的hp0540基因的原核表达系统,并制备其多克隆抗体.方法: 应用PCR技术从Hp11637基因组DNA中扩增hp0540基因片段,克隆至pMD18-2T载体后,进行序列测定,并对其序列进行生物信息学分析;构建pET-28a-hp0540原核表达载体,转化表达宿主菌BL21DE3;经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE法鉴定目的蛋白的表达,并以Ni2+-NTA柱分离纯化目的蛋白;将纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体并测定抗体效价.结果: 成功克隆了hp0540基因,全长1 086 bp,编码361个氨基酸,与基因库公布的其他Hp菌株基因序列的核苷酸同源性为98%.工程菌诱导后SDS-PAGE显示新生表达蛋白带,相对分子质量约为39 000,经Ni2+-NTA柱纯化后可获得重组蛋白,重组蛋白免疫新西兰大白兔后获得效价为1∶ 160 000的多克隆抗体.结论: 成功构建了hp0540基因的原核表达系统并制备了其多克隆抗体,为研究该基因的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邵世和	江苏大学基础医学与医学技术学院病原生物学研究室	99	382	9.0	14.0
2	黄河	江苏大学生命科学研究院	13	31	3.0	5.0
3	田树伟	江苏大学生命科学研究院	6	9	2.0	2.0
4	韩军	江苏大学生命科学研究院	6	9	2.0	2.0
5	黄世腾	江苏大学基础医学与医学技术学院病原生物学研究室	5	9	2.0	2.0
6	谢立苹	江苏大学基础医学与医学技术学院病原生物学研究室	4	11	2.0	3.0