Rig-I蛋白C端Helicase结构域的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备

• 作者: 任华 李金鞠 杜冰 王自强 钱旻
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Rig-I Helicase 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2010,（9）
• 页码范围: 774-777,782
• 分类号: R392.33
• 字数: 4387字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2010.09.002

摘要

目的:为Rig-I蛋白结构与模式识别功能的深入研究提供灵敏、高效的免疫学检测试剂.方法:PCR法克隆小鼠Rig-I基因Helicase区编码序列(726～2 240 bp,编码241～746位氨基酸),构建带组氨酸标签的原核表达载体pET15b-mRig-I-H,阳性克隆经酶切、测序鉴定后转化E.coli BL21进行诱导表达.目的蛋白电泳分离并割胶纯化后免疫家兔制备抗血清.抗血清用ELISA、Western blot、细胞免疫荧光方法进行鉴定.结果:目的蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,制备的抗Rig-I抗体效价达到1∶100 000,Western blot、细胞免疫荧光结果显示该抗体能够有效地对细胞内Rig-I蛋白的表达水平进行检测.结论:成功地对mRig-I-H进行了原核表达、纯化,抗mRig-I-H的多克隆抗体具有较高的特异性,为进一步研究Rig-I尤其是Helicase区的结构与功能奠定了坚实的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钱旻	华东师范大学生命科学学院	65	376	12.0	16.0
2	杜冰	华东师范大学生命科学学院	27	115	6.0	10.0
3	李金鞠	华东师范大学生命科学学院	1	4	1.0	1.0
4	任华	华东师范大学生命科学学院	9	55	4.0	7.0
5	王自强	华东师范大学生命科学学院	5	31	3.0	5.0