人腺苷激酶在大肠杆菌中的表达与纯化

• 作者: 孙敏英 杨学习 马瑞娟 黄湘
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 腺苷激酶 表达 纯化 包涵体 复性
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究论著
• 页码范围: 34-36,44
• 页数: 4页
• 分类号: Q555.7
• 语种: 中文

摘要

目的 诱导人腺苷激酶组组蛋自在大肠杆菌中表达,并对表达的重组蛋白进行纯化.方法 将由人腺苷激酶基因开放阅读框与原核表达载体pET30a(+)连接构建的重组蛋白表达载体pET30a(+)/ADK转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)感受态细胞.1 mmol/L的IPTG诱导重组蛋白表达.离心收集菌体后结合使用溶菌酶、冻融和超声破碎的方法裂解菌体.用含2 mol/L和4 mol/L尿素的结合缓冲液洗涤包涵体去除部分杂蛋白.随后用含8 mol/L尿素的结合缓冲液变性溶解剩余包涵体沉淀.用Ni-NTA柱通过亲和层析纯化重组蛋白,用含8 mol/L尿素的洗脱缓冲液洗脱.收集样品透析复性.结果 成功构建人腺苷激酶原核表达载体且目的 蛋白以包涵体形式表达.经包涵体洗涤、变性溶解,亲和层析及分步透析复性获得纯度达85%以上的重组蛋白.结论 人腺苷激酶表达载体的成功构建以及重组蛋白的纯化.为进一步进行其结构和功能的研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨学习	南方医科大学生物技术学院	47	163	6.0	9.0
2	黄湘	嘉应学院医学院基础部病原教研室	10	22	3.0	3.0
3	孙敏英	南方医科大学生物技术学院	10	45	4.0	6.0
4	马瑞娟	南方医科大学生物技术学院	2	1	1.0	1.0