E2F-1基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 丁思阳 杜一飞 江飞 牛玉明 袁华 陈宁
• 来源期刊: 口腔生物医学
• 学科: 生物学
• 关键词: E2F-1 RNA干扰 口腔鳞癌 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 17-20,25
• 分类号: Q782
• 字数: 4347字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-8603.2011.01.004

摘要

目的:构建和鉴定靶向E2F-1基因的RNA干扰慢病毒载体.方法:体外合成两对互补并编码靶向E2F-1基因的特异性短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列和一个阴性对照组的寡核苷酸,克隆到pLKO.1-PURO-U6(Age I/EcoR I)质粒载体中,经酶切和测序鉴定所构建的重组载体是否正确,将以上质粒分别和包装质粒混合物共转染293T细胞,包装产生病毒颗粒.各组病毒载体转染Tca8113细胞后,运用Real-Time PCR 和Western检测三组E2F-1 mRNA和蛋白的表达水平.结果:经酶切和测序证明,pLKO.1-PURO-U6-E2F-1shRNA序列正确;转染后,各组慢病毒载体中,第一组质粒感染后的Tca8113细胞中E2F-1基因的核酸电泳条带明显减弱,Western检测出E2F-1蛋白的表达降低.结论:靶向E2F-1基因的shRNA慢病毒载体构建成功,并可特异性沉默E2F-1基因的表达,为研究E2F-1在口腔鳞癌的发生发展中的作用提供了初步的实验基础.