刚地弓形虫NT株MIC3基因的克隆和原核表达

• 作者: 冯志新 刘茂军 吴叙苏 孔猛 熊祺琰 白方方 白昀 邵国青
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 刚地弓形虫 MIC3基因 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 1295-1299
• 分类号: S851.34+7.103
• 字数: 3526字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2011.06.022

摘要

为构建刚地弓形虫微线体蛋白3(MIC3)原核表达体系,获得高纯度MIC3蛋白用于制备单克隆抗体,评价MIC3蛋白在临床诊断方面的应用价值,根据刚地弓形虫MIC3基因编码的已知序列设计引物,应用PCR技术从刚地弓形虫NT株的基因组DNA中扩增出去除信号肽的MIC3基因,将该基因克隆入pET-32a(+)表达载体,构建pET-32a(+)表达载体,并转化人大肠杆菌(Escherichia.coli)Trans 5α感受态细胞.扩增的MIC3基因与GenBank.中相应基因序列(AF509564.1)的同源性达99.9％.将阳性重组表达质粒转化人E.coli BL21-codon plus,经IPTG20℃低温诱导表达,SDS-PAGE分析结果显示,MIC3融合蛋白分子量约为56000.Western-blotting分析鉴定结果表明,MIC3融合蛋白可被猪抗弓形虫免疫血清所识别.获得的MIC3融合蛋白具有一定的反应原性,为下一步利用重组蛋白建立弓形虫的诊断方法和研制弓形虫的亚单位疫苗奠定了基础.