结核分枝杆菌rESAT-6-CFP-10融合蛋白的构建和表达及其免疫反应性分析

• 作者: John T. Belisle 宋广忠 李召东 泮结超 漏磊君 石君帆
• 来源期刊: 国际流行病学传染病学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 分枝杆菌,结核 esat-6-cfp10融合基因 rESAT-6-CFP-10融合蛋白
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 100-104
• 分类号: R5
• 字数: 4602字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-4149.2011.02.008

摘要

目的 构建结核分枝杆菌H37Rv 株esat-6-cfp-10(简称ec)融合基因及其原核表达载体pET-23b(+).esat-6-cfp-10[以下简称pET-23b(+)-ec],表达、纯化融合蛋白rESAT-6-CFP-10(简称rEC),并分析其免疫反应性.方法 采用基因拼接技术将ESAT-6和CFP-10编码基因用疏水甘氨酸接头(Gly4Ser)3进行PCR扩增融合.构建TA克隆载体pMD 19-T-esat-6-cfp-10(简称pMD+ 19-T-ec),利用PCR、酶切和测序进行鉴定.经限制性内切酶Nde Ⅰ、Xho Ⅰ双酶切后将融合基因定向克隆入原核表达载体pET-23b(+).将构建正确的重组质粒pET-23b(+).ec转化E.coli BL21(DE3)pLysE,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导rEC的表达.十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Westem印迹法分析其表达情况.用镍离子螯合亲和层析柱纯化融合蛋白.用Western印迹初步评价融合蛋白的免疫反应性.结果 融合基因及其原、核表达载体构建成功,融合蛋白以可溶性非包涵体形式表达,相对分子质量为21 000,表达量约占菌体总蛋白的35%.经亲和层析后得到了纯度达97.2%的融合蛋白.Western印迹证实,融合蛋白能与确诊的肺结核患者血清发生特异性免疫应答.结论 成功构建了原核表达载体pET-23b(+).ec,获得了rEC融合蛋白,为rEC融合蛋白在结核病诊断中的应用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	石君帆	浙江省医学科学院寄生虫病研究所	17	30	3.0	4.0
2	宋广忠	浙江省医学科学院寄生虫病研究所	13	26	3.0	4.0
3	漏磊君	浙江省医学科学院寄生虫病研究所	14	47	4.0	6.0
4	李召东	杭州市红十字会医院检验科	17	43	4.0	5.0
5	泮结超	浙江省医学科学院寄生虫病研究所	5	11	2.0	3.0