蜱传脑炎病毒TBE-E-D3抗原的原核表达纯化及ELISA方法鉴定

• 作者: 姜永强 康晓平 杨银辉 王丹 郑玉玲 郝淮杰 陈福生
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: 蜱传脑炎病毒 TBE-E-D3抗原 原核表达 纯化 特异性
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 636-639,666
• 分类号: Q78|R392.1
• 字数: 3781字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2011.05.008

摘要

目的:构建蜱传脑炎病毒TBE-E-D3抗原的融合蛋白原核表达质粒GSTpET-30a(+)/lBE-E-D3,在大肠杆菌中诱导表达并用亲和层析法纯化,以获得特异性诊断抗原.方法:根据目的基因序列设计PCR引物,利用基因克隆技术构建重组质粒,转入大肠杆菌DH5α后经酶切鉴定,将测序正确的重组质粒转入大肠杆菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达后进行亲和层析法纯化,SDS-PAGE分析其表达情况和纯度,间接ELISA法鉴定重组蛋白的特异性和灵敏度.结果:TBE-E-D3基因目的片段以正确的读框插入载体GSTpET-30a(+),通过IPTG诱导在大肠杆菌中正确表达,亲和纯化得到较高纯度的蛋白质；间接ELISA法证明抗原特异性和灵敏度良好,送检的15份阳性患者血清样本中检出10份阳性结果,40份健康人血清样本中检出1份假阳性结果.结论:获得的His-TBE-E-D3融合蛋白具有良好的抗原性,可作为森林脑炎病毒特异性血清学诊断的备选抗原之一.