猪IgGⅡB类Fc受体剪接异构体胞外区及结构域的原核表达与抗体制备

• 作者: 刘玉松 刘肖萍 夏平安 崔保安 张凤华 张志远 徐红运 范旭 赵琳
• 来源期刊: 河南农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 FcγRHB 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医学
• 页码范围: 307-312
• 分类号: S852.2
• 字数: 4232字
• 语种: 中文

摘要

根据GenBank中猪IgGⅡB类Fc受体剪切异构体基因序列(FJ608551),利用Primer 5.0软件设计合成3对特异性引物,从质粒pTG 19 -T-swFcγRIIB1中用PCR方法扩增编码胞外区、EC1及EC2结构域蛋白分子基因片段,PCR产物经KpnⅠ和EcoR Ⅰ双酶切后将其插入到原核表达载体pET-32a中,构建了3种猪FcγRIIB剪接异构体原核表达载体pET-EY,pET-AY,pET-BY,转化大肠杆菌BL21,在IPTG诱导下成功表达了相对分子质量约为36,29,27 kD融合蛋白表达,纯化后的融合蛋白分别免疫小鼠制备鼠源血清.ELISA结果显示抗体效价为1:5 120,1:5 120,1:10 240.免疫印迹结果显示制备的多克隆抗体可以与融合蛋白特异性结合.