抗人CD4嵌合抗体基因真核表达质粒的构建及其瞬时表达

• 作者: 孙可芳 张爱华 张银川 杨晓明 潘勇兵 端义坤 胡迪超
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 抗原,CD4 RLM-RACE 基因拼接 嵌合抗体 瞬时表达
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 997-1006,1012
• 分类号: Q782
• 语种: 中文

摘要

目的 构建抗人CD4嵌合抗体基因真核表达质粒,并在哺乳动物细胞中进行瞬时表达.方法 采用RLM-RACE法克隆WuT4抗体可变区和信号肽序列,并采用基因拼接法构建嵌合抗体基因真核表达质粒.采用脂质体法瞬时转染HEK293T、CHO-DHFR-和COS-7 3种哺乳动物细胞,ELISA法检测转染细胞上清中嵌合抗体的浓度,流式细胞术、Western blot和Dot blot分析嵌合抗体的抗原结合活性,并对表达的嵌合抗体进行免疫荧光分析.结果 成功克隆了WuT4抗体可变区和信号肽序列；抗人CD4嵌合抗体共表达质粒pOptiVEC-T4H和pcDNA3.3-T4L构建正确；表达的嵌合抗体保留了亲本抗体的抗原结合力,并能特异性识别人CD4分子；免疫荧光分析表明,表达的嵌合抗体含人抗体的重、轻链恒定区.结论 已成功构建了抗人CD4嵌合抗体基因真核表达质粒,并能在哺乳动物细胞中瞬时表达,为其进一步研究奠定了基础.