耐酸性黑曲霉β-甘露聚糖酶的克隆及其在毕赤酵母中的表达分析

• 作者: 张娟 罗长财
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: β-甘露聚糖酶 黑曲霉 毕赤酵母 表达
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 182-187
• 分类号: Q78|Q55
• 字数: 4801字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2011.02.008

摘要

目的:克隆黑曲霉β-甘露聚糖酶基因,研究该基因在毕赤酵母中的表达情况.方法:运用RT-PCR从黑曲霉AN070902中克隆β-甘露聚糖酶cDNA片段,与载体pPIC9K相连,构建重组载体VMAN-pPIC9K,电转化毕赤酵母GS115,筛选产酶最高菌株进行5 L液体发酵,对该菌株所产重组酶进行酶学性质分析.结果:克隆获得1152 bp.cDNA,编码由383个氨基酸残基组成的蛋白质,该蛋白质属于GH5家族,理论pl和相对分子质量分别为4.48和41.6x103;筛选获得的重组菌株VMAN-pPIC9K-GS115在5 L液体发酵中上清酶活达11 785 U/mL;表达的重组酶是一种酸性β-甘露聚糖酶,最适反应pH值为3.0,经pH2.0-9.0处理2 h后剩余酶活保持90%以上;该重组酶最适反应温度为65℃,70℃处理1 h后剩余酶活保持75%以上;该重组酶活性被1 mmol/L的Fe3+和Mn2+显著抑制,被1mmol/L的Co2+显著激活.结论:重组耐酸性β-甘露聚糖酶的特性,决定了其在工业生产中,特别是动物饲料和食品加工中具有应用价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗长财		9	55	4.0	7.0
2	张娟		1	7	1.0	1.0