HIV自然感染与疫苗诱导产生抗体鉴别肽的原核表达及纯化

• 作者: 张君 张秀瑜 胡接力 袁作为 郑建 黄爱龙
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: HIV 自然感染 疫苗 抗体 抗原肽 诊断,鉴别
• 年，卷（期）: 2011,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1254-1258,1263
• 分类号: R373.9|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 原核表达并纯化HIV自然感染与疫苗诱导产生抗体鉴别肽skl、sk2、sk3及3条肽段串联序列.方法 用普通PCR及重叠延伸PCR法从HIV-1 B亚型质粒扩增得到sk1、sk2、sk3基因序列及3条肽段基因片段的6种连接序列,并分别克隆人原核表达载体pET-32a(+)及pGEX4T-2中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Ni-NAT或谷胱甘肽-Sepharose-4B层析柱亲和层析纯化.SDS-PAGE分析融合肽的表达,Western blot分析融合肽的抗原性.结果 分别以pET-32a(+)和pGEX4T-2为载体,共构建了18个重组表达质粒；his-sk1、his-sk123、his-sk213、his-sk231及GST-sk3、GST-sk123、GST-sk213分别在pET-32a(+)及pGEX4T-2表达载体中以可溶形式表达,且均能与HIV-1阳性血清反应,而不能与HIV DNA-天坛疫苗免疫血清反应；经大量诱导表达纯化后,GST-sk3表达量最高,可达40 mg/L,纯度超过90％.结论 已成功表达并纯化了具有生物学活性的HIV自然感染与疫苗诱导产生抗体鉴别肽,为研制HIV自然感染与疫苗诱导产生抗体鉴别诊断试剂盒奠定了基础.