亚洲玉米螟GOBP2的克隆、原核表达及多克隆抗体制备

• 作者: 原国辉 安世恒 王海亭 王甜甜 程晓东 罗梅浩 郭线茹
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 亚洲玉米螟 普通气味结合蛋白2 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2011,（10）
• 所属期刊栏目: 植物保护
• 页码范围: 2029-2038
• 分类号: S435.132
• 语种: 中文
• DOI: 10.3846/j.issn.0578-175.2011.10.008

摘要

[目的]克隆、序列分析和原核表达亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)GOBP2(OfurOOBP2)的cDNA.[方法]以亚洲玉米螟触角为材料,采用RT-PCR结合RACE方法克隆OfurGOBP2的pDNA序列,并在pGEX-4T-2/BL21(DE3)系统中进行原核表达,进一步利用制备的抗体检测OfurGOBP2蛋白.[结果]从亚洲玉米螟触角中获得了GOBP2的cDNA序列(GenBank登录号为DQ673101),序列分析表明,OfurGOBP2开放阅读框489 bp,编码162个氨基酸残基,氨基酸序列中有6个保守的半胱氨酸位点,具有气味结合蛋白的典型特征.一致性分析显示,OfurGOBP2与其它鳞翅目昆虫GOBP2编码的氨基酸一致性较高,表明昆虫的GOBP2在分子进化过程中是保守的.进一步将OfurGOBP2与表达载体pGEX-4T-2连接,转入大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导成功表达了相对分子质量为41 kD的可溶性融合蛋白.SDS-PAGE分析和Western印迹检测结果表明,OfurGOBP2能够高效表达,并与预测的融合蛋白分子量相符.利用制备的多克隆抗体对亚洲玉米螟GOBP2进行Western-blot分析,证明其能够特异识别OfurGOBP2蛋白.[结论]成功克隆了编码并表达亚洲玉米螟气味结合蛋白GOBP2的cDNA序列,并制备了多克隆抗体,可用于深入研究亚洲玉米螟GOBP2的结构和功能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭线茹	河南农业大学植物保护学院	138	1361	20.0	27.0
2	原国辉	河南农业大学植物保护学院	142	1540	23.0	31.0
3	罗梅浩	河南农业大学植物保护学院	88	1100	20.0	26.0
4	安世恒	河南农业大学植物保护学院	39	184	8.0	11.0
5	程晓东	河南农业大学植物保护学院	6	47	5.0	6.0
6	王海亭	河南农业大学植物保护学院	4	38	4.0	4.0
7	王甜甜	河南农业大学植物保护学院	8	30	3.0	5.0