真核表达质粒PcDNA3.1(+)-带有白蛋白信号肽的Vasostatin(120-180aa)的构建及其在体内外细胞中的表达

• 作者: 关继奎 刘建巨 李丹 王琳 赵秀梅 郑建秋 闫庆慧
• 来源期刊: 中国实验诊断学
• 学科: 生物学
• 关键词: Vasostatin(120-180aa) 293T细胞 基因克隆 真核表达
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 11-14
• 分类号: Q782
• 字数: 2726字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-4287.2011.01.004

摘要

目的 构建真核表达质粒PcDNA3.1(+)-带有白蛋白信号肽的Vasostatin(120-180aa)并了解其在体内外真核细胞中的表达.方法 将带有白蛋白信号肽的Vasostatin(120-180aa)的逆转录聚合酶链式反应 (RT-PCR)产物克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体上,经酶切鉴定及测序分析证明构建成功后,以脂质体介导法转染体外培养的真核293T细胞及注射入鼠骨骼肌细胞中,了解其在体内外真核细胞中的表达情况.结果 我们获取了包含带有白蛋白信号肽的Vasostatin(120-180aa)成熟肽及HA抗原在内的一段cDNA片段,并成功地与真核表达载体PcDNA3.1(+)连接,经测序表明,其中含有的带有白蛋白信号肽的Vasostatin(120-180aa)成熟肽的序列与Genebank上报道的序列完全一致.即我们成功构建了真核表达质粒PcDNA3.1(+)-带有白蛋白信号肽的Vasostatin(120-180aa).之后,在转染了该质粒的体外真核293T细胞的上清液中及骨骼肌注射了该质粒的鼠血液中,利用Western-blot法检测到了目的 基因的蛋白质.结论 带有白蛋白信号肽的真核表达质粒PcDNA3.1(+)-Vasostatin(120-180aa)增强了蛋白分泌表达能力,这为进一步应用该质粒治疗全身新生血管类病奠定了一定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	关继奎		22	100	6.0	9.0
2	赵秀梅		2	3	1.0	1.0
3	刘建巨		3	8	2.0	2.0
4	王琳		1	1	1.0	1.0
5	郑建秋		1	1	1.0	1.0
6	李丹		1	1	1.0	1.0