人源弹性蛋白酶基因真核载体构建及表达

• 作者: 王海峰 田洪涛 罗云波 苏春元 许文涛 谷新晰 邱芳萍 黄昆仑
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 生物学
• 关键词: 人源弹性蛋白酶 毕赤酵母 基因克隆 蛋白表达
• 年，卷（期）: 2011,（10）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 215-219
• 分类号: Q789
• 语种: 中文

摘要

从人体肾脏组织中提取的总RNA中通过反转录PCR（RT—PCR）扩增得到了ELA2B基因，并将其克隆到pGEM—Teasy载体中。然后用限制性内切酶EcoRI和NotI对重组质粒pGEM—Teasy／ELA2B和毕赤酵母质粒pHC9K进行双酶切，并且通过PCR技术去除ELA2B的信号肽，成功构建了真核表达载体pPIC9K／ELA2B，并将其转入毕赤酵母表达宿主GS115中。得到150株转化子，经含不同浓度G418的YPD平板筛选获得20株高拷贝转化子。甲醇诱导表达后．发酵液上清经SDS—PAGE检测，获得了大小约为28ku的目的条带。通过酪蛋白平板检测发酵液上清，出现透明圈．初步证明获得了有生物活性的弹性蛋白酶。