青杄FKBP12基因原核表达和多克隆抗体的制备

• 作者: 张凌云 王雨涵 黄桂雪
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 青杄 FKBP12基因 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 34-38
• 分类号: Q786
• 字数: 4753字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2012.03.62

摘要

目的:制备青杄FKBP12基因的多克隆抗体,为进一步分析FKBP12的蛋白定位、表达等提供基础.方法:采用PCR方法扩增FKBP12基因得到其全长cDNA序列,并将其克隆至原核表达载体pET - 48b中,转化入BL21菌株.经IPTG诱导,表达了分子量约为33kD的重组蛋白,SDS-PAGE和Western blotting检测鉴定表达产物.此蛋白经亲和纯化后,作为抗原注射新西兰兔,进行抗体制备.结果:成功获取了多克隆抗体,制备的FKBP12兔抗血清效价在1:729 000以上,ELISA结果表明融合蛋白具良好的免疫原性.间接ELISA法检测纯化后抗体效价,表明纯化后抗FKBP蛋白兔多克隆抗体效价高,检测灵敏度为16ng/mL.结论:所制备的抗体能满足后续试验要求的效价值,为进一步研究提供基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张凌云	北京林业大学森林培育与保护教育部重点实验室	39	174	8.0	12.0
2	黄桂雪	北京林业大学森林培育与保护教育部重点实验室	2	4	1.0	2.0
3	王雨涵	北京林业大学森林培育与保护教育部重点实验室	2	5	1.0	2.0