pGEX-5X-1-hLMO4原核质粒构建及重组蛋白表达

• 作者: 姚远 张红艳 李丰 李彦姝 王春玉 王迪
• 来源期刊: 东南大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: LMO4 蛋白纯化 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 139-143
• 分类号: Q291|Q591.2
• 字数: 3122字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6264.2012.02.003

摘要

目的:构建hLMO4的原核表达载体并诱导、纯化和鉴定其表达.方法:hLMO4全长编码基因经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,异丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)在BL21大肠杆菌中诱导GST-hLMO4融合蛋白表达,利用Glutathione Sepharose 4B纯化诱导的融合蛋白,并经Western blot鉴定结果.结果:hLMO4编码序列克隆至pGEX-5X-1载体中,双酶切鉴定片段大小为500 bp,在E.coli BL21中IPTG诱导融合蛋白的表达,分子质量约为49 000 Da,成功纯化出GST及GST-hLMO4蛋白,Western blot检测到蛋白表达.结论:构建了hLMO4基因原核表达载体,鉴定了GST-hLMO4融合蛋白表达.