人可溶性TRAIL原核表达载体的构建和蛋白表达、纯化及活性鉴定

• 作者: 党景东 刘转转 刘雯 尤红娟 徐志辉 汤仁仙 赵金金 郑葵阳
• 来源期刊: 苏州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 克隆 原核表达 凋亡
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 629-633,673
• 分类号: R730.51|Q78
• 语种: 中文

摘要

目的 建立高效表达可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)蛋白的原核表达载体,获得高生物学活性的TRAIL蛋白.方法 取健康人外周血提取总RNA,RT-PCR扩增TRAIL基因的胞外区片段,克隆入原核表达载体pET30a中,经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆.重组载体转化感受态细胞BL21,优化蛋白表达条件；亲和层析法纯化重组蛋白；SDS-PAGE蛋白电泳、Western blot鉴定.重组蛋白与TRAIL蛋白标准品分别作用Huh-7细胞,CCK8、流式细胞术检测蛋白生物学作用.结果 DNA测序结果证实成功构建重组质粒pET30a/TRAIL,SDS-PAGE蛋白电泳、Western blot显示pET30a/TRAIL诱导的为可溶性的His-rTRAIL.CCK8、流式细胞术检测结果显示,与TRAIL蛋白标准品相比,His-rTRAIL对Huh-7细胞具有良好的促凋亡作用.结论 成功构建高效表达可溶性TRAIL蛋白的原核表达载体pET30a/TRAIL,表达的可溶性蛋白His-rTRAIL具有高度的生物学作用,为肿瘤的生物学治疗提供新的实验依据.