呼吸道合胞病毒NS1基因原核表达及其免疫原性分析

• 作者: 伍时冠 关文达 刘昆 李海涛 杨子峰 潘思华 秦笙 陈俏连
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 呼吸道合胞病毒 非结构蛋白 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2012,（8）
• 所属期刊栏目: 试验研究论著
• 页码范围: 926-929
• 分类号: R373.1
• 语种: 中文

摘要

目的:原核表达呼吸道合胞病毒(RSV)非结构NS1蛋白,并对其免疫特性进行研究.方法 采用PCR技术获得NS1基因,将其插入pET41a(+)载体上,导人大肠杆菌后诱导表达;利用GST亲和层析柱对诱导表达的NS1蛋白进行纯化,免疫动物制备抗体,Western blot法鉴定抗体的特异性.结果 重组质粒经酶切鉴定和DNA序列测序完全正确,经IPTG诱导后融合蛋白在大肠杆菌BL21-DE3中得到高效表达,表达产物经超声破碎和GST亲和层析纯化获得重组蛋白,分子量约42 000 Mr,以抗NS1蛋白的多克隆抗体为一抗进行Western blot检测,结果只有RSV感染细胞的样品在15 000 Mr处有特异性带显示,其他病毒感染的细胞和阴性对照没有相应条带.结论 NS1基因得到高效表达,免疫制备得到的抗体与RSV感染细胞有特异性反应,与其他常见呼吸道病毒感染细胞无交叉免疫反应.