TCAB1基因RNAi慢病毒载体的构建及在人子宫内膜间质细胞中沉默TCAB1基因的效应

• 作者: 倪婕 史颖莉 袁春桃 陈捷 顾林
• 来源期刊: 中国优生与遗传杂志
• 学科: 医学
• 关键词: TCAB1 shRNA RNA干扰 慢病毒载体 子宫内膜异位症
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 分子、生物遗传学与PCR技术
• 页码范围: 6-8
• 页数: 3页
• 分类号: R394.3
• 语种: 中文

摘要

目的 构建TCAB1基因RNAi慢病毒载体,为子宫内膜异位症(EMs)的基因靶向治疗提供理论依据.方法 化学合成3条靶向TCAB1基因的siRNA,转染HEK - 293T细胞,24h后采用荧光素酶报告系统筛选有效siRNA,其对TCAB1mRNA有明显抑制作用.针对已经筛选确定的TCAB1基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经XhoI和HpaI酶切后的LV1载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接产生LV1 - shRNA慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.用LV1 - shRNA、pRev、pVsvg、pcgv四质粒共转染包装细胞HEK - 293T细胞,包装产生慢病毒,分别于转染后48h、72h收取病毒上清,感染人子宫内膜间质细胞(ESC),进行RT - qPCR检测TCAB1基因相对表达量,检测LV1 - shRNA干扰效率.结果 PCR和测序证实,成功构建TCAB1 shRNA的慢病毒载体LV1 - shRNA.结论 成功构建TCAB1基因的RNAi慢病毒载体,其转染ESC细胞后显著抑制了TCAB1的表达,为子宫内膜异位症的基因靶向治疗提供了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	袁春桃		4	19	1.0	4.0
2	史颖莉		12	35	4.0	5.0
3	倪婕		8	14	2.0	3.0
4	顾林		13	54	4.0	7.0
5	陈捷		10	19	3.0	4.0