单增李斯特菌多克隆抗体制备及其在乳胶凝集试验中的应用

• 作者: 原野 孟日增 宋秀玲 张士尧 徐坤 方珍 李娟 鞠文
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 单增李斯特菌 多克隆抗体 乳胶凝集试验
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 821-826
• 页数: 6页
• 分类号: R155
• 字数: 3403字
• 语种: 中文

摘要

目的:制备高效价高纯度兔抗单增李斯特菌(LM)多克隆抗体,并初步探讨其在乳胶凝集试验(LAT)中的应用.方法:复苏并扩大培养LM标准菌株,制备灭活疫苗免疫家兔,采用ELISA法测定耳缘静脉血抗体效价.4次免疫后,颈动脉采血分离血清,采用辛酸-饱和硫酸铵法粗分离,经蛋白亲和层析柱HiTrap Protein G HP进行IgG纯化,采用SDS-PAGE电泳、紫外分光光度法、间接ELISA法分别测定蛋白纯度、蛋白含量及抗体效价.得到的高效价提纯IgG与乳胶微球进行共价偶联,并选择偶联乳胶的IgG含量及偶联时间等条件,建立快速检测模拟样品中LM的方法.结果:制备并纯化的兔抗LM IgG蛋白浓度为23.364 g·L-1,效价为1∶12 800～1∶25 600,与霍乱弧菌、沙门氏菌、志贺菌等多种菌均无交叉反应,与斯氏李斯特菌有弱交叉反应；致敏时IgG与乳胶微球偶联比率为1∶40;利用LAT方法检测246份样品,阳性检出率为87.5％,最低检出抗原含量为0.039 8 g· L-1.结论:制备了高效价、高纯度的兔抗LM多克隆抗体；建立的LAT方法特异性强,敏感性较高,重复性好,便于基层推广使用,为LM的现场检测提供了一种新手段.