靶向大鼠HIF-1α的RNAi慢病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 周东 曾天芳 李耀华 陈蕾
• 来源期刊: 西部医学
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 HIF-1α 慢病毒
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 基础医学与实验研究
• 页码范围: 1050-1053
• 分类号: R456
• 字数: 3270字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3511.2012.06.005

摘要

目的 构建靶向HIF-1α的RNAi慢病毒载体,为进一步观察其对难治性癫痫大鼠模型脑内HIF-1a基因过度表达的干扰作用奠定基础.方法 根据GenBank报道的大鼠HIF-1α基因序列,选择4个靶序列,设计并合成4对含编码短发夹RNA(shRNA)序列的寡核苷酸,双链退火后,插入经限制性内切酶Age I和EcoR I处理所得的线性化慢病毒载体pGCSIL-GFP(表达绿色荧光蛋白,GFP)的U6启动子下游,合成4种重组病毒pGCSIL-GFP-shRNA1,2,3,4,经酶切和测序鉴定构建正确后,分别与Lipofectamine 2000共转染293T细胞包装,收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液浓缩后得到高滴度的慢病毒液,孔稀释法测定病毒滴度.采用同样方法构建阴性对照重组慢病毒.结果 酶切和测序分析证实成功构建了靶向大鼠HIF-1α的慢病毒表达载体4对,滴度为(5～7)×108 TU/ml.结论 本实验成功构建了针对大鼠HIF- 1α基因的RNAi慢病毒载体,为实现在细胞和动物模型以慢病毒为载体的HIF-1a靶向治疗提供了良好的实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周东	四川大学华西医院神经内科	223	1149	17.0	25.0
2	陈蕾	四川大学华西医院神经内科	46	259	9.0	15.0
3	曾天芳	四川大学华西医院神经内科	10	64	6.0	8.0
4	李耀华	四川大学华西医院神经内科	2	31	1.0	2.0