新疆红肉苹果PGIP基因的克隆及原核表达

• 作者: 冯守千 吴树敬 孙华 宋杨 张芮 王春燕 陈学森 陈晓流
• 来源期刊: 果树学报
• 学科: 农学
• 关键词: 新疆红肉苹果 多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白 基因克隆 表达
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 种质资源·遗传育种·分子生物学
• 页码范围: 1-7
• 页数: 7页
• 分类号: S661.1
• 语种: 中文

摘要

[目的]研究克隆新疆红肉苹果[Malus sieversii f.neidzwetzkyana(Dieck) Langenf] PGIP基因并进行原核表达,探讨其抗病机制.[方法]根据Genbank中已经发表的‘金冠’苹果PGIP保守区域设计1对特异引物,以新疆红肉苹果叶片总RNA为模板,T/A克隆后进行序列测定,并对该序列进行分析.随后将该蛋白成熟肽cDNA片段连接到原核表达载体pET30a(+)中,构建融合表达质粒,转化到E coli BL21 (DE3)中进行表达.[结果]序列分析表明,新疆红肉苹果PGIP基因cDNA编码区全长993 bp,编码330个氨基酸残基,命名为Ms Pgip,GenBank登录号为JQ001783.Ms Pgip分子质量为36.6 kD,等电点为7.05,有6个潜在的N-糖基化位点,信号肽为N端24个氨基酸残基.该蛋白质还具有2个连续的24个氨基酸残基大小的LRR基序(LSQLKNLTFLDLSFNNLTGAIPSSLSQ LPNLN ALHLDRNKLTGHIPIS).与已克隆的‘澳洲青苹’、‘金冠’、‘富士’苹果PGIP氨基酸序列同源性均高达99％.原核表达产物经SDS-PAGE分析表明,表达蛋白的分子质量与预期一致.[结论]克隆了新疆红肉苹果PGIP基因,并可在大肠杆菌中表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈学森		148	3891	38.0	56.0
2	孙华		24	98	6.0	9.0
3	陈晓流		19	413	12.0	19.0
4	王春燕		1	0	0.0	0.0
5	宋杨		3	85	2.0	3.0
6	吴树敬		9	275	5.0	9.0
7	张芮		4	17	2.0	4.0
8	冯守千		3	74	1.0	3.0