双启动子共表达杆状病毒载体的构建和鉴定

• 作者: 刘帅 张一帆 张美丽 李彪 王俊 王士礼 王安琪 王建章 蔡昌枰
• 来源期刊: 国际病毒学杂志
• 关键词: 杆状病毒 双启动子 共表达 双基因传递载体 多基因联合治疗
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 207-211
• 页数: 5页
• 字数: 4511字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3706/cma.j.issn.1673-4092.2013.05.004

摘要

目的 探讨双启动子共表达杆状病毒载体作为双基因传递载体的可行性.方法 利用分子克隆技术将分别由巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)启动子介导下的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)和胶质细胞源形神经生长因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)克隆到pFastBac Dual载体中,得到重组质粒pFastBac Dual-CMV-EGFP-CMV-GDNF,并利用Lipofectamine 2000将其转染到HEK293T细胞,通过间接免疫荧光法检测EGFP和GDNF的表达情况.按照Bac-to-Bac杆状病毒表达系统手册进行杆状病毒的包装,将获得的重组病毒Bac Dual-CMV-EGFP-CMV-GDNF转导Hela细胞,通过间接免疫荧光法和Western blot检测EGFP和GDNF的表达情况.结果 重组质粒pFastBac Dual-CMV-EGFP-CMV-GDNF成功构建；重组病毒Bac Dual-CMV-EGFP-CMV-GDNF成功包装；EGFP和GDNF实现了在293T细胞中和Hela细胞中的共表达.结论 pFastBac Dual载体为一个有效的双基因传递载体,为多基因联合治疗提供了一个强有力的病毒载体.