松材线虫类毒过敏原蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

• 作者: 刘倩 卜祥霞 林世锋 简恒 赵海娟
• 来源期刊: 植物病理学报
• 学科: 农学
• 关键词: 松材线虫 类毒过敏原蛋白 基因优化 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 病原学
• 页码范围: 128-135
• 页数: 8页
• 分类号: S432.45
• 字数: 4602字
• 语种: 中文

摘要

利用重叠延伸PCR基因合成法,按大肠杆菌偏爱密码子,合成松材线虫类毒过敏原蛋白基因(Bxvap2),将其连接到原核表达载体pET-29b(+)上.获得的重组子转化大肠杆菌BL21(DE3)后,用IPTG进行诱导表达.SDS-PAGE分析表明,目的蛋白以可溶形式高效表达,占细菌总蛋白的33.5％.将表达产物经Ni-NTA亲和柱纯化后进行质谱分析,结果显示纯化的蛋白为BXVAP2蛋白.用制备的BXVAP2蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,间接ELISA测得抗体灵敏度5.4 ng·mL-1(效价为1∶1 360 000),为进一步研究该蛋白的组织定位及功能,明确该基因在致病过程中的作用机理奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林世锋		16	35	3.0	4.0
5	简恒	中国农业大学植物病理学系农业部植物病理学重点实验室	45	658	15.0	24.0
6	赵海娟	中国农业大学植物病理学系农业部植物病理学重点实验室	2	16	2.0	2.0
7	卜祥霞	中国农业大学植物病理学系农业部植物病理学重点实验室	2	16	2.0	2.0
8	刘倩	中国农业大学植物病理学系农业部植物病理学重点实验室	14	110	5.0	10.0