坛紫菜 TPS 基因的克隆及其原核表达

• 作者: 刘涛 牛倩雅 王斌 翁曼丽 邓淑贞 郭宝太 高磊
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 地球科学
• 关键词: 坛紫菜 TPS基因 原核表达 重组菌 耐盐性
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 页码范围: 66-73
• 页数: 8页
• 分类号: Q781|P735
• 字数: 4893字
• 语种: 中文

摘要

以叶状体总 DNA 为模板，用3对DNA 引物进行 PCR 扩增，获得了坛紫菜6-磷酸海藻糖合成酶基因（PhTPS）3个重叠的片段，大小分别为1．3，1．1，0．7 kb。用pMD18-T载体克隆这些片段，经测序与序列拼接获得了该基因完整的ORF序列，其长度为2727 bp。在已经构建条斑紫菜TPS基因原核表达载体pET22 b-PyTPS的基础上，用PhTPS基因替代该表达载体中的PyTPS基因，获得了 PhTPS基因的原核表达载体 pET22b-PhTPS。重组菌BL21（pET22b-PhTPS）经IPTG诱导，SDS-PAGE显示获得了约100 kDa的特异性蛋白条带；目测及OD600的测定结果表明重组菌的耐盐性明显高于对照菌，即PhTPS基因的表达提高了重组菌的耐盐性。为利用PhTPS基因进行作物耐盐等抗逆转基因改良提供了依据。