Darier病ATP2A2基因A68E突变的定点诱变及其突变载体构建

• 作者: 冯捷 刁庆春 史丙俊 江阳 胡刚 薛梅
• 来源期刊: 中国皮肤性病学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 大引物PCR ATP2A2 毛囊角化病 定点诱变 pcDNA3.1
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 29-32
• 页数: 4页
• 分类号: R751
• 字数: 2938字
• 语种: 中文

摘要

目的 利用大引物PCR技术对发现的中国人Darier病ATP2A2基因A68E突变进行体外定点诱变,并构建携带有突变基因的真核表达载体.方法 首先设计三条引物(包括两条外侧正向和反向引物以及内部突变引物),通过2轮PCR扩增,扩增出含有所需突变位点的片段(ATP2A2-A68E),然后将突变片段克隆入pGEM-T载体中,通过双酶切后进行连接,将目的片段重组至真核表达载体pcDNA3.1中.结果 用大引物PCR法成功构建ATP2A2基因A68E突变片段,测序结果显示了ATP2 A2基因上203位碱基C已变为A,此突变导致ATP2A2基因第68位密码子由丙氨酸变为谷氨酸.结论 pcDNA3.1-ATP2A2-A68E突变体的成功构建,为进一步进行该突变体的结构与功能的研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	冯捷	西安交通大学医学院第二附属医院皮肤科	77	519	12.0	19.0
2	胡刚	西安交通大学医学院第二附属医院皮肤科	23	143	7.0	11.0