A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的表达纯化及活性检测

• 作者: 刘畅 卢清侠 张改平 杨继飞 王世红 王寅彪 邓瑞广 郭官鹏
• 来源期刊: 西北农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: A型口蹄疫病毒 VP1蛋白 原核表达 蛋白纯化 活性鉴定
• 年，卷（期）: 2013,（9）
• 页码范围: 7-12
• 页数: 6页
• 分类号: S852.65
• 字数: 5155字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7606/j.issn.1004-1389.2013.09.002

摘要

为获得具有活性的A型FMDV VP1蛋白,以A型vp1重组质粒pMD19T-A-vp1为模板,利用PCR扩增得到A型FMDV vp1基因片段,将此基因片段与原核表达载体pET28a连接,构建重组质粒pET-Avp1.经IPTG诱导表达含重组质粒pET-A-vp1的E.coli BL21 (DE3)菌后,SDS-PAGE显示VP1蛋白以包涵体形式获得高效表达,蛋白分子质量约为29 ku.通过对IPTG浓度及诱导时间进行优化,结果表明,在37 C条件下,IPTG终浓度为0.3 mmol/L,诱导表达6h后,VP1蛋白的表达量最大.Western-Blot分析表明,VP1重组蛋白能够被A型口蹄疫阳性血清特异性识别.ELISA检测结果显示,VP1包涵体蛋白经洗涤纯化,尿素浓度梯度透析复性后具有较高的活性.