趋化因子受体3 RNA干扰慢病毒载体的构建及对嗜酸粒细胞作用的初步研究

• 作者: 刘月辉 刘轲 廖兵 朱新华 王心悦
• 来源期刊: 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志
• 关键词: RNA干扰 受体,CCR3 慢病毒属 嗜酸细胞
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 316-321
• 页数: 6页
• 字数: 6127字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-0860.2013.04.012

摘要

目的 构建趋化因子受体3(chemokine receptor 3,CCR3)基因RNA干扰(RNAinterference,RNAi)慢病毒表达载体,了解其对嗜酸粒细胞的作用.方法 针对小鼠CCR3基因序列,设计出RNAi的靶序列,退火形成双链DNA,与经MluⅠ、Sac Ⅰ、EcoR Ⅰ、HindⅢ、BamH Ⅰ和Xho Ⅰ进行酶切后的pLVX-shRNA2-m载体连接产生短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体.应用shRNA慢病毒载体转染293T细胞及嗜酸粒细胞,测定病毒滴度,实时定量聚合酶链反应检测嗜酸粒细胞中CCR3基因mRNA的表达情况.结果 成功构建了shRNA-mCCR3慢病毒载体,经测序与设计合成的靶向链完全一致.荧光显微镜下观察293T细胞感染效率大于90％,病毒滴度为4×108 TU/ml;对嗜酸粒细胞CCR3基因沉默效率为86.7％.结论 成功构建CCR3基因RNAi慢病毒表达载体,为后续感染嗜酸粒细胞,探索其在变应性鼻炎发生和发展中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘月辉	南昌大学第二附属医院耳鼻咽喉头颈外科	78	294	7.0	14.0
2	朱新华	南昌大学第二附属医院耳鼻咽喉头颈外科	28	68	6.0	6.0
3	王心悦	南昌大学第二附属医院耳鼻咽喉头颈外科	2	6	2.0	2.0
4	廖兵	江西省肿瘤医院头颈一科	2	4	1.0	2.0
5	刘轲	南昌大学第二附属医院耳鼻咽喉头颈外科	4	10	2.0	3.0