黄瓜脂氧合酶基因CsLOX2的原核表达载体的构建及表达分析

• 作者: 万旭花 王聪颖 申晓青 程智慧 郝丽宁 陈书霞 陈巧
• 来源期刊: 中国蔬菜
• 学科: 农学
• 关键词: 黄瓜 脂氧合酶 原核表达
• 年，卷（期）: 2013,（10）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 29-35
• 页数: 7页
• 分类号: S642.2
• 字数: 5513字
• 语种: 中文

摘要

以先前克隆到的黄瓜脂氧合酶基因CsLOX2全长的cDNA为模板,用含有特异性酶切位点的Yh1、Yh2为引物,通过PCR方法将黄瓜脂氧合酶基因CsLOX2的ORF区构建到大肠杆菌表达载体pGEX-4T-1上获得原核表达载体p4t-LOX2,将该表达载体p4t-LOX2转化到大肠杆菌菌株BL21(DE3)中,获得相应的重组工程菌.在IPTG诱导下,通过SDS-PAGE电泳,得到一条约115 kD的融合蛋白条带,除去pGEX-4T-1自身诱导的约26 kD大小的GST标签蛋白后,CsL OX2编码一个约89 kD的蛋白.经过融合蛋白表达体系的优化分析,表明该融合蛋白在37℃,0.80 mmol·L-1 IPTG诱导表达10.5 h,可获得融合蛋白的最大表达量.