副溶血弧菌的磁珠捕获及检测

• 作者: 徐锋 明星 武晓丽 王报贵 甘敏 董素琴 陈星星 陈飞
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 工学
• 关键词: 副溶血弧菌 多克隆抗体 免疫磁珠 PCR
• 年，卷（期）: 2013,（13）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 147-152
• 分类号: TS201.3
• 语种: 中文

摘要

建立结合免疫磁珠和PCR快速检测副溶血性弧菌的新方法.本研究选用副溶血弧菌作为抗原免疫日本大耳兔制备了多克隆抗体,用ELISA法检测抗体效价.利用辛酸硫酸铵沉淀结合逆向吸附对多抗血清进行纯化,经SDS-PAGE和斑点杂交检测验证纯化后抗体的特异性.将纯化后的抗体偶联于羧基化修饰的纳米磁珠表面,用来进行菌体的捕获.结果表明,抗体的效价达到106,纯化获得只与副溶血弧菌发生反应的高纯度抗体.制备的免疫磁珠捕获率在55％ ～70％之间,且稳定性较好,盐离子浓度(3.5％ NaCl、4.5％ NaCl)对捕获率的影响不大,在pH5～9之间,磁珠捕获差异也较小.在对纯培养物的检测实验中,本方法最低检测限为102cfu/mL;而在鱼肉糜样本中的检测限为103cfu/mL,且样品中高浓度杂菌的存在不影响检测灵敏度.免疫磁珠结合PCR用于副溶血性弧菌的检测具有很高的灵敏度和特异性,具有广阔的前景.