香蕉内生拮抗细菌KKWB-5的几丁质酶在大肠杆菌中的表达纯化与复性研究

• 作者: 卢娟 卢雪花 夏启玉 张欣 王宇光 顾文亮
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 拮抗细菌 几丁质酶 表达纯化 复性 活性分析
• 年，卷（期）: 2013,（33）
• 所属期刊栏目: 生物技术-研究报告
• 页码范围: 307-312
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-6850.2013.33.054

摘要

将香蕉内生拮抗细菌KKWB-5的几丁质酶在大肠杆菌中的表达，旨在检测该酶对香蕉枯萎病病原菌4号小种的抗性。PCR扩增该基因连入大肠杆菌表达载体pET22b，导入大肠杆菌BL21(DE3)， IPTG诱导重组菌株，SDS-PAGE分析目的蛋白的表达，对目的蛋白进行纯化，并将纯化后的目的蛋白复性，对复性产物进行水解几丁质活性和拮抗香蕉枯萎病活性的分析。SDS-PAGE分析表明目的蛋白在大肠杆菌中以包涵体的形式大量表达，经变性Ni2+柱纯化得到了高纯度的重组蛋白，表达量达293 mg/L；稀释和透析2种复性方法中，透析复性法的目的蛋白得率较高，为84.6%。复性后的目的蛋白具有水解几丁质的活性，同时对香蕉枯萎病病原菌也具有一定的抗性，但抗性较弱。该几丁质酶在大肠杆菌中得到高效表达，且复性后的几丁质酶对香蕉枯萎病病原菌4号小种有一定的抑制作用，该酶对KKWB-5菌株拮抗香蕉枯萎病菌的能力有一定的贡献。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张欣	中国热带农业科学院环境与植物保护研究所	64	658	15.0	23.0
2	夏启玉	中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物技术重点开放实验室	12	92	5.0	9.0
3	卢娟		2	2	1.0	1.0
4	卢雪花	中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物技术重点开放实验室	2	18	2.0	2.0