Daxx-C626-740原核细胞表达载体的构建与诱导表达

• 作者: 万艳平 何爱桃 周艺 唐双阳 李耀林 王蓉
• 来源期刊: 中国医药指南
• 学科: 医学
• 关键词: Daxx 表达 纯化 抗原性
• 年，卷（期）: 2013,（35）
• 所属期刊栏目: 论 著
• 页码范围: 1-2,3
• 页数: 3页
• 分类号: R373
• 字数: 2736字
• 语种: 中文

摘要

目的：为了研制 Daxx-C 抗体并观察其在宫颈癌细胞中的应用效果，构建原核表达载体 pET28a/DM626-740，将其在大肠杆菌中进行诱导表达，纯化表达产物，鉴定其抗原性。方法用 PRIMER5.0软件设计 Daxx-C 基因片段（氨基酸626-740）特异性引物，引入BamHI 和 SalI 酶切位点，PCR 扩增目的基因。将 PCR 产物连入载体 pMD18-T，构建 pMD18-T/DM626-740；然后，将 BamHI 和 SalI 酶切产物连入载体 pET28a，经酶切鉴定及 DNA 序列分析后，构建原核表达载体 pET28a/DM626-740。将其转化 E.coli BL21，IPTG 诱导表达，利用 Ni 琼脂糖凝胶层析柱纯化表达产物，Western-blot 检测表达物与纯产物。结果双酶切和 DNA 测序结果显示，PCR 正确扩增了Daxx-C 基因片段并成功连入载体 pET28a，构建了原核表达载体 pET28a/DM626-740；该质粒在 E.coli 中诱导表达分子量约19kDa 目的蛋白，且该蛋白能被抗 Daxx 抗体检出。结论构建的原核表达载体 pET28a/DM626-740能在 E.coli 中表达目的的蛋白6His-DM626-740，并具有良好的抗原性。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	万艳平	南华大学病原生物学研究所	157	780	13.0	20.0
5	唐双阳	南华大学病原生物学研究所	71	348	11.0	15.0
6	王蓉	南华大学护理学院	72	381	11.0	15.0
7	何爱桃	南华大学病原生物学研究所	47	256	10.0	13.0
11	周艺	南华大学病原生物学研究所	26	88	7.0	9.0
15	李耀林	南华大学病原生物学研究所	3	1	1.0	1.0